超高效液相色谱-高分辨质谱法测定缬沙坦中4种N-亚硝胺类遗传毒性杂质
1.北京市药品检验研究院 / 北京市疫苗检验中心，国家药品监督管理局监管科学创新研究基地，北京 102206；
2.华润双鹤药业股份有限公司，北京 101111
收稿日期: 2025-09-08
修回日期: 2026-01-27
录用日期: 2026-03-18
网络出版日期: 2026-04-21
基金资助
国家药典委员会药品标准制修订研究课题（2018H043）
Determination of 4 N-Nitrosamine Genotoxic Impurities in Valsartan by UPLC-Quadrupole/Orbitrap High-Resolution Mass Spectrometry
Received date: 2025-09-08
Revised date: 2026-01-27
Accepted date: 2026-03-18
Online published: 2026-04-21
目的：建立一种超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-HRMS）同时检测缬沙坦中4种N-亚硝胺类遗传毒性杂质：N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）、N-亚硝基乙基异丙胺（NEIPA）、N-亚硝基二异丙胺（NDIPA）、N-亚硝基二丁胺（NDBA）。方法：采用Phenomenex Kinetex F5（100 mm×4.6 mm，2.6 μm）色谱柱；以0.1%甲酸水溶液为流动相A，0.1%甲酸甲醇溶液为流动相B，进行线性梯度洗脱；流速0.6 mL·min-1；柱温40 ℃；检测器为质谱检测器；采用电喷雾离子源；检测方式为选择离子模式（SIM）和平行反应检测模式（PRM）；喷雾电压3.5 kV；毛细管温度350 ℃，鞘气流量40 arb，辅助气体流量10 arb，辅助气体温度300℃，以外标法对4个遗传毒性杂质同时进行定量测定。结果：空白溶剂和缬沙坦均不干扰缬沙坦中NMBA、NEIPA、NDIPA、NDBA的检测；4种亚硝胺类遗传毒性杂质在0.4~100 ng·mL-1范围内线性均良好，相关系数（r）均大于0.999 5；检测限均为0.2 ng·mL-1，定量限均为0.4 ng·mL-1；低、中、高3个浓度的加样回收率良好，平均回收率（n = 9）为80.5%~100.3%；相对标准偏差（RSD）分别为2.9%~8.9%。4种亚硝胺类遗传毒性杂质进样精密度和重复性RSD分别为1.6%~2.9%和2.1%~9.0%，10 h内溶液稳定，样品中均未检出杂质。结论：该方法灵敏度高、样品制备简便，专属性和准确度好，可用于缬沙坦中4种遗传毒性杂质同时检出。
关键词： 缬沙坦; 高分辨质谱; 遗传毒性杂质; N-亚硝基-N-甲基-4氨基丁酸; N-亚硝基乙基异丙胺; N-亚硝基二异丙胺; N-亚硝基二丁胺
吴兆伟
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李宜玲
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刘清梁
,
吴斌
,
王琳
,
张喆
,
胡琴
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超高效液相色谱-高分辨质谱法测定缬沙坦中4种N-亚硝胺类遗传毒性杂质
Objective： To establish an ultra-high performance liquid chromatography coupled with quadrupole/orbitrap high-resolution mass spectrometry （UPLC-HRMS） method for the simultaneous determination of four nitrosamine genotoxic impurities in Valsartan： N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyric acid （NMBA）， N-Nitrosoethylisopropylamine （NEIPA）， N-Nitrosodiisopropylamine （NDIPA）， and N-Nitrosodibutylamine （NDBA）.Methods： Separation was achieved using a Phenomenex Kinetex F5 column （100 mm × 4.6 mm， 2.6 μm） with a mobile phase consisting of 0.1% formic acid in water （mobile phase A） and 0.1% formic acid in methanol （mobile phase B） under a linear gradient elution program. The flow rate was set at 0.6 mL·min⁻¹， and the column temperature was maintained at 40 ℃. Detection was carried out using a mass spectrometer equipped with an electrospray ionization （ESI） source. The instrument was operated in selected ion monitoring （SIM） and parallel reaction monitoring （PRM） modes. The spray voltage was 3.5 kV， the capillary temperature was 350 ℃， the sheath gas flow rate was 40 arb， and the auxiliary gas flow rate and temperature were set at 10 arb and 300 ℃， respectively. Quantification of the four genotoxic impurities was performed using the external standard method.Results： Neither the blank solvent nor valsartan interfered with the detection of NMBA， NEIPA， NDIPA， and NDBA in valsartan. The four nitrosamine genotoxic impurities exhibited good linearity within the concentration range of 0.4-100 ng·mL⁻¹， with correlation coefficients （r） all greater than 0.9995. The limits of detection （LOD） and quantification （LOQ） were 0.2 ng·mL⁻¹ and 0.4 ng·mL⁻¹， respectively. The spike recovery rates at low， medium， and high concentrations were satisfactory， with average recoveries （n=9） ranging from 80.5% to 100.3%. The relative standard deviations （RSD） ranged from 2.9% to 8.9%. The injection precision and repeatability RSD for the four nitrosamine genotoxic impurities were 1.6%-2.9% and 2.1%-9.0%， respectively. The solutions remained stable within 10 hours， and no impurities were detected in the samples.Conclusion： The method is sensitive， simple， specific， and accurate， and can be used for the simultaneous detection of the four genotoxic impurities in Valsartan.
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